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Laboratorio de biologia molecular

Por:

María Paula Urian Ávila ¹, ² , Leidy Alejandra Giraldo ¹, Juan Esteban Lamprea¹, Luna Valentina Villarraga¹, Laura Camila Largo¹, María Helena Bonilla¹, Cesar Orlando Muñoz¹.

¹.Grupo de Investigación On Site Research, On Site Diagnostic S.A.S. Medellín (Colombia)²Pregrado en Medicina Veterinaria. Facultad de Medicina Veterinaria y de Zootecnia. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá (Colombia)

PRIMERA CARACTERIZACIÓN DE LA FRECUENCIA DE LA MUTACIÓN nt230[del4] DEL GEN MDR1 EN RAZAS CANINAS EN COLOMBIA.

El gen MDR1 es el encargado de expresar la glicoproteína P, una proteína transportadora localizada en barrera hematoencefálica, intestino grueso, intestino delgado, riñón e hígado . Esta proteína tiene un papel fundamental expulsando fármacos del interior de las células , restringiendo su acumulación en el organismo . En 2001, en perros se identifi có la deleción de cuatro pares de bases en el exón 4 del gen MDR1, denominada MDR1-1Δ o mutación de nt230[del4] gen MDR1 (Mealey et al, 2001), esta mutación produce que fármacos que normalmente son expulsados de manera segura, se acumulen en el organismo, sobre todo en el sistema nervioso central, provocando neurotoxicidad severa. Sin embargo, hoy se conoce que la mutación MDR1-1Δ no solo confiere sensibilidad a las lactonas macrocíclicas (doramectina, ivermectina, moxidectina, selamectina) sino también ha sido reportada sensibilidad para butorfanol, loperamida, acepromacina, apomorfi na, vincristina, entre otros. Por lo tanto, la detección de la mutación MDR1 es un componente relevante para la seguridad farmacogenética en la práctica veterinaria. En otros países, se ha realizado caracterización de las razas de caninos que presentan esta mutación, mientras que en Colombia no se contaba con datos sobre la frecuencia de esta mutación, por ende el objetivo del presente estudio fue determinar la frecuencia de la mutación nt230[del4] MDR1 en razas caninas en Colombia.

Figura 1. Órganos afectados por la mutación MDR1

Como metodología, se recibieron muestras de sangre de perros de razas pastoras y no pastoras. Se extrajo ADN mediante Kit Comercial, se realizó qPCR con sondas específi cas marcadas con FAM para el alelo mutante y HEX para el alelo normal siguiendo la metodología de Klintzsch et al (2009). El termociclador recopiló los datos de fl uorescencia para FAM y HEX y este método nos permitió discriminar entre individuos homocigotos normales (+/+), heterocigotos (+/-) y homocigotos mutados (-/-).

Hasta este momento, se han recibido 210 muestras de 20 razas caninas, más de la mitad de muestras provienen de razas de pastoreo (63.3%), mientras que 33.8% proviene de razas no pastoras. Como resultados preliminares el alelo mutado heterocigoto fue identifi cado en 5 razas (Pastor Ovejero Australiano, Pastor Collie, Border Collie, Viejo Pastor Ovejero (Bobtail), Pastor Shetland). La frecuencia de los alelos mutados y normales fueron medidos en los ejemplares de cada raza ( Tabla 1). Razas como Pastor Ovejero Australiano y Pastor Collie se destacan con porcentaje mayor al 20% de heterocigotos. Mientras que Border Collie presenta mutación heterocigota del 3.8%. Adicionalmente, ninguna de las razas no pastoras presentaron mutación MDR1 (Tabla 2)

Tabla 1. Frecuencia de los alelos en razas de pastoreo
Tabla 2. Razas no pastoras donde la mutación MDR1 nt230[del4] no fue encontrada

Al compararlos con la literatura internacional, la frecuencia encontrada en Pastor Ovejero Australiano (26.9%) es muy similar a lo reportado en Tailandia (25.6%) y se acerca a los valores de Brasil, Estados Unidos y Austria, que oscilan entre el 31% y el 37%. Sin embargo, en el caso del Pastor Collie, la frecuencia de 23.5% de heterocigotos es menor a lo reportado a nivel mundial, por ejemplo, en Brasil y Estados Unidos se
reportan heterocigotos por encima del 40%. En el Border Collie, la frecuencia de 3.8% de heterocigotos se alinea con la tendencia mundial de baja prevalencia, similar a lo reportado en México, Argentina, Brasil y Reino Unido. Este estudio proporciona un marco epidemiológico que sustenta el uso de la farmacogenética para la decisión de administración segura de medicamentos en la población canina colombiana.

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